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本制品不含血清及其他异种成分，不含抗生素和细胞因子，人血清白蛋白和人转铁蛋白是仅有的人来源成分，可使同种异体细胞治疗中的人T淋巴细胞(CD4+、CD8+、多克隆或抗原特异性)获得良好的生长速度和活性，可获得更安全的细胞和更一致的结果。适用于促进和优化人T淋巴细胞的体外活化和高效扩增。

T细胞无血清培养基含有T细胞生长所需的完整的营养成分，产品包含T细胞基础培养基以及T细胞扩增添加剂，使用前将两者混合即制成1×培养基。

• 无血清，无异种成分，安全性高，批次差异小。
  
• 完整的营养成分，不需要额外添加血清或白蛋白，便于从研究到临床应用的转化，降低了CAR-T药物的申报难度。
  
• 支持T细胞体外活化和扩增培养，在静态培养中支持高密度T细胞培养(例如＞7×10⁶ CD3+ T细胞/ml)。

• 本培养基支持T细胞的培养，不需要额外添加人类血清。如果实验需要，可以使用2～5%热灭活人血清添加到培养基中以增强T细胞的生存能力和扩增能力。血清的具体添加量取决于特定的T细胞培养经验。
  
• 细胞因子和刺激用抗体请在使用前加入培养基中。
  
• 对于静态T细胞的培养，为了保持最佳气体交换，建议培养基深度不超过1-1.2cm。
  
• 可以使用无血清细胞冻存液(货号：LA10287)进行T细胞的冻存。
  
• 本制品为无菌包装，请注意无菌取用。
  
• 为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

• 配制完全培养基：
  
  • 使用前请先将T细胞扩增添加剂从-20℃取出，2～8℃融化后在无菌环境下，将T细胞扩增添加剂全部加入到T细胞基础培养基中，混合均匀。
    注：混合后的培养基请于2～8℃避光保存，并在四周内使用完。
    
  • 加入终浓度为2mM的L-谷氨酰胺溶液(货号：LA10109)。
    
  • 可按需选择添加抗生素。建议使用10～50μg/mL的庆大霉素(货号：LA10112)或1%的青霉素/链霉素溶液(货号：LA10119)
  
  
• 培养T淋巴细胞(静态培养)：
  Day 0：
  
  • 常规方法制备新鲜外周血单个核细胞(PBMC)或复苏冻存的PBMC。
    
  • 用免疫细胞清洗液(货号：LA10180)或PBS或生理盐水重悬细胞，并进行活细胞计数。
    
  • 200～500×g离心3～5分钟，弃上清。
    
  • 用完全培养基重悬并调整细胞数到1×10⁶ cells/ml，接种到合适的培养瓶或培养皿中。
    注：完全培养基在使用前请添加必需的细胞因子和刺激用抗体。建议使用100-200 IU/ml IL-2(货号：LA10384)和合适浓度的CD3/CD28抗体来激活T细胞的扩增。细胞因子和抗体的种类以及添加量可以根据具体实验需求而调整。
    
  • 置于37℃，5% CO₂的细胞培养箱静置培养。
  
  Day 3：
  
  • 充分混匀细胞悬液，进行活细胞计数。
    
  • 加入新鲜的完全培养基(添加细胞因子)将活细胞密度调整为0.5～1×10⁶ cells/ml。
    
  • 继续置于37℃，5% CO₂的细胞培养箱静置培养。
  
  Day 3以后：
  
  • 为了保持细胞处于对数增长期，请每2～3天视具体情况进行新鲜完全培养基(添加细胞因子)的补充，使细胞密度保持在0.5～1×10⁶ cells/ml。
    
  • 一般培养14～21天即可收获T细胞。